Мясопептонного агар (МПА) — самое распространенное универсальное питательную среду в микробиологических исследованиях.
Состав
- ферментативный пептон
- экстракт мяса (1: 2)
- натрия хлорид
- глюкоза
Описание
Препарат представляет собой плотное питательную среду желтого цвета.
Выпускается в виде плотной питательной среды по 300 мл в стеклянных флаконах, откупоренных пробками завальцованы алюминиевыми колпаками.
Назначение
Используется для культивирования и изучения культуральных свойств различных микроорганизмов.
Возможно использование препарата как питательной основы для приготовления различных питательных сред целевого назначения.
Хранение
Срок годности — 2 года. Сохраняется среда герметично закрытым при температуре от 2 до 25 ° C в местах, защищенных от воздействия прямых солнечных лучей.
Приготовление
До 1 л мясо-пептонам бульона добавляют 15-20 г мелко нарезанного агар-агара. Среда нагревают до растворения агара (температура плавления его 100 ° С, застывания -40 ° С), устанавливают слабощелочную реакцию среды 20% -ным раствором Na2CO3, a и через воронки разливают в пробирки (но 10 мл для розливок в чашки — агар столбиком и по 5 мл для получения скошенного, наклонного агара). При разливке агара необходимо следить затем, чтобы края пробирки были сухими, иначе пробки прилипают к стеклу. Пробирки со средой стерилизуют в автоклаве при 120 ° С в течение 20 мин.
Существует и другой вариант среды — мясо-пептона желатина (МПЖ), где вместо агара для затвердевания среды используют желатин. В 1 л бульона мясопептонного добавляют 100-150 г желатина. Температура плавления зависит от процентного содержания в среде. 10% желатина плавится при 24 ° С, 15% — при 25 °. В летнее время среды готовят, добавляя 15% желатины. После растворения желатина при осторожном нагревании в среде устанавливают слабощелочную реакцию (как и для МПБ и МПА), кипятят в течение 5 мин, затем охлаждают-до 40-50 ° С Одновременно яичный белок взбивают с небольшим количеством воды, вливают его в охлажденную желатиновую среду, хорошо взбалтывают и снова нагревают. Среда после выпадения белков становится прозрачным. Его фильтруют через горячую воронку, разливают в пробирки и стерилизуют в кипятильнике Коха текучим паром, прогревая среду по 30 мин через 24 ч три раза.
Простые питательные среды Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред. Готовят на мясной воде с добавлением готового пептона. Пептон – продукт неполного переваривания (гидролиза) белка, используется как источник азота и углерода. Мясо-пептонный агар (МПА) – получают путём добавления к МПБ 1, 5 – 3% a г ap — a г apa. Агар-агар – продукт из морских водорослей, содержит высокомолекулярные полисахариды
Селективные питательные среды стимулируют рост одних микробов и угнетают рост других (за счет добавления в среду определённых компонентов). Так как в этих средах патогенные бактерии размножаются и накапливаются, их называют также средами обогащения. Например, среда Мюллера служит для накопления сальмонелл. К питательной среде добавляют мел, раствор Люголя и гипосульфит натрия. При взаимодействии этих веществ образуется тетратионат натрия, который угнетает рост кишечных палочек, но создает благоприятные условия для размножения сальмонелл.
Дифференциально-диагностич еские среды позволяют отличить один вид микроба от другого на основании разной биохимической активности бактерий. В состав дифференциально-диагностических сред входят: — основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий, — определенный химический субстрат, различное отношение к которому является диагностическим признаком, — индикатор, изменение цвета которого свидетельствует о расщеплении субстрата и образовании конечных продуктов.
Среда Эндо Состав: питательный агар, лактоза, основной фуксин. Среда имеет розовый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в темно-красный цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.
Среда Левина Состав: питательный агар, лактоза, эозин и метиленовый синий. Среда имеет коричневатый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в темно-синий цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.
Среда Плоскирева Состав: питательный агар, лактоза, нейтральный красный, соли желчных кислот, бриллиантовый зелёный. Среда имеет розовато-желтоватый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в бруснично-красный цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.
Техника посевов Метод Дригальского: Каплю исследуемого материала вносят в первую чашку Петри и стерильным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга и будут образовываться изолированные колонии. Посев петлёй параллельными штрихами
Посев петлёй параллельными штрихами Колония - это видимое изолированное скопление представителей одного вида микроорганизмов, образующееся при размножении одной бактериальной клетки на плотной питательной среде. Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по культуральным признакам.
К 1000 мл мясопептонного бульона перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения.
Мясопептонный агар, охлажденный до температуры 50- - 55° С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 мл мясопептонного агара), помешают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в аппарат Коха на 1 ч чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горячий Мясопептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают в нем рН 7,0-7,4, разливают во флаконы или пробирки и 20 мин стерилизуют в автоклаве при температуре 120° С.
Мясопептонный желатин
К мясопептонному бульону прибавляют мелко нарезанный желатин из расчета ю-15 г на 100 мл. После набухания желатин растворяют при медленном нагревании в водяной бане при температуре 40-45 °С, устанавливают рН=7,0 10%-ным раствором бикарбоната натрия, фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде. Среду разливают в пробирки по 5-8 мл, стерилизуют дробно 3 дня по часу при температуре 100° С или однократно при 110° С в течение 20 мин. После стерилизации среду охлаждают.
Пептонная вода
К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия, кипятят до растворения пептона, фильтруют и устанавливают рН 7,2- 7,4, после чего стерилизуют 30 мин при температуре 120° С.
Элективные среды для выявления возбудителей пищевых то кс и ко инфекций Среды фуксин - сульфитный агар (среда Эндо), бакто-агар Плоскирева, ме-тилен-эозиновая среда Левина, висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера) готовят из сухих стандартных сред по прописи, указанной на этикетке.
Среда Смирнова
К 1 л расплавленного МП А добавить 10-12 г лактозы и 4-5 мл 1,2% раствора бромкрезолпурпур. Стерилизовать дробно (или при 0,5 атм 20 мин).
Среды накопления сальмонелл Среда Мюллера Для приготовления среды Мюллера готовят вначале растворы серноватисто-кислого натрия и Люголя.
В мерный цилиндр с 50 г серноватистокислого натрия добавляют до 100 мл Дистиллированной воды. Раствор переливают в бутыль и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Для приготовления среды Мюллера в стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела и стерилизуют их сухим паром в течение 1 ч. Затем наливают в каждый флакон по 90 мл бульона из перевара Хоттингера, содержащего 130- 150 мг % азота, устанавливают рН 7,2-7,4 и стерилизуют 30 мин при температуре
120°С После стерилизации вновь устанавливают рН 7,2-7,4, для чего проверяют в одном из флаконов и определяют необходимый для подтитровки данного количества среды объем соляной кислоты или гидрата окиси натрия. Затем в асептических условиях перед употреблением добавляют по 2 мл раствора Лю-голя и по 10 мл раствора серноватистокислого натрия.
Таблица 1 Рост возбудителей пищевых токсикоинфекций на элективных средах и МПА
|
Название |
Среда до |
Кишечная |
Сальмонелла | |
|
Мелкие колонии |
Мелкие колонии |
Сплошной |
||
|
Розового |
красного цвета с |
цвета среды, цвет |
рост, цвет |
|
|
металлическим |
среды не меняет- |
среды не |
||
|
оттенком, среда |
меняется |
|||
|
вокруг краснеет | ||||
|
Смирнова |
фиолетово- |
Мелкие колонии |
Мелкие колонии |
Сплошной |
|
го цвета |
желтого цвета, |
цвета среды, с |
рост, цвет |
|
|
среда вокруг |
голубым оттен- |
среды не |
||
|
ком, цвет среды не меняется |
меняется |
|||
|
Коричнево- |
Мелкие колонии |
Мелкие колонии |
Сплошной |
|
|
го цвета |
темно-бурого |
цвета среды, с |
рост, цвет |
|
|
цвета, цвет сре- |
сиреневым от- |
среды не |
||
|
ды не меняется |
тенком, цвет среды не меняется |
меняется |
||
|
Плоскире- |
Кирпично- |
Мелкие колонии |
Мелкие колонии |
Отдельные |
|
красного |
красного цвета, |
цвета среды, сре- | ||
|
цвет среды не меняется |
да вокруг немного просветляется |
цвета среды |
||
|
Соломенно- |
Мелкие колонии |
Мелкие колонии |
Сплошной |
|
|
серого цвета |
серого цвета с |
рост, цвет |
||
|
голубоватым оттенком |
среды не меняется |
Мясопептонный бульон мясопептонный бульон
(Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.)
Мясопептонный бульон(МПБ) - основная жидкая питательная среда, используемая для выращивания хемоорганотрофных бактерий. Готовят на основе мясной воды или 0,5 - 1% водного р-ра мясного экстракта, добавляя к ним 0,5-1% пептона и 0,5% натрия хлорида. Устанавливают рН 7,4 -7,6. Стерилизуют автоклавированием при 120°С в течение 15- 30 мин. См. Питательные среды бактериологические .
(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)
Смотреть что такое "мясопептонный бульон" в других словарях:
- (МПБ) жидкая питательная среда для культивирования микроорганизмов, состоящая из мясной воды и пептона (1 2%); служит основой многих других жидких питательных сред … Большой медицинский словарь
Мясной отвар, питательная среда, применяемая для культивирования микроорганизмов, участвующих в деградации белков. В зависимости от добавок различают, напр., глицериновый Б., нитратный Б., лактозный Б., наибольшее распространение имеет… … Словарь микробиологии
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ - ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, искусственные среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных условиях. Впервые были введены для изолирования отдельных видов бактерий Р. Кохом в 1881 году, что создало… … Большая медицинская энциклопедия
Субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности. Питательные среды различаются по назначению, консистенции и составу. По назначению их… … Медицинская энциклопедия
Питательная среда вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред. Содержание 1 Требования, предъявляемые к средам 2 Классификация … Википедия
Под именем бактерий в науке известны мельчайшие, микроскопической величины организмы, принадлежащие к растительному царству. По своей организации, по своим морфологическим особенностям, Б. ближе всего стоят к так называемым циановым или… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона
Аг антиген АЕ антитоксическая или антигенная единица антибактер. антибактериальный Ат антитело АТФ аденозинтрифосфорная кислота бактер. бактериальный бактериол бактериологический бактериоскоп. бактериоскопический БАС бактерицидная активность… … Словарь микробиологии
К 100 мл мясного бульона добавляют 1 % пептона Пептон- это продукт ферментативного гидролиза белков. Добавляют пептон в среду для увеличения ее питательности, для уплотнения среды в нее добавляют от 2 до 4 % агар-агара
Питательная среда д.б. слабокислой по отношению к цитоплазме микроорганизмов, которые будут выращиваться в ней. Для этого в среду добавляют 0,5% поваренной соли. Реакция среды от 7,0 до 7,4. После введения агар-агара смесь прогревают до неполного студнеобразования.
Приготовление мясо-пептонного желатина.
Эта среда готовится аналогично МПА, но для уплотнения ее применяют на агар-агар, желатин в количестве 10-12% . МПЖ имеет ряд преимуществ перед МПА. Он Лучше соединяется со стеклом, гнилостные бактерии образуют при росте на этой среде весьма характерные колонии, кроме того, некоторые из гнилостных бактерий обладают способностью разжижать желатин, что очень важно для определения вида бактерий. Но МПЖ" плавится при температуре 30-37 0 С, в этом его недостаток.
Дня изучения биохимических признаков микроорганизмов пользуются дифференциально-фагностическими средами. Примером таких сред могут служить среды Гисса. Их применяют для изучения способности м.о. ферментировать углеводы.
В состав сред Гисса входит 1% какого-либо углевода, 1% агар-агара и индикатор. Примером такой среды является и среда Эндо, применяемая для выделения Bact. coli. В состав этой среды входит, кроме МПА, насыщенный спиртовой раствор фуксина, 1% лактозы Na 2 SO 3 , рН 7-7,2 Bact. coli дает на среде Эндо колонии с металлическим блеском. Для изучения плесневых грибов используют среду Сабуро, следующего состава: 1% глюкозы, 1% пептона, 2% агар-агара рН 5-5.6.
ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ:
Приготовить 100 мл МПА:
1. В кастрюлю напивают воду и ставят на горелку - готовят водяную баню.
2. В колбу наливают 100 мл МБ. Взвешивают 2 г. пептона. 0,5 г. агар-агара. Все это помещают в колбу с мясным бульоном.
3. Колбу ставят в кастрюлю с горячей водой и содержимое колбы подогревают до тех пор пока полностью не расплавится агар-агар и среда не станет однородной. Затем добавляют соды (до слабощелочной реакции по лакмусу).
4. Расплавленную среду разливают в пробирки по 10 мл.
5. Готовят ватные пробирки, обтягивают их марлей и закрывают пробки с приготовленной питательной средой.
6. Пробирки с МПА помещают в корзины. Сдают лаборанту для стерилизации.
Классификация питательных сред
По составу питательную среду подразделяют на 2 группы: натуральные среды неопределенного состава и синтетические среды.
Натуральными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный хим. состав. Основой таких сред являются различные части зеленых растений, животные ткани. солод, дрожжи, фрукты, овощи... Большинство из них используется в виде экстрактов или настоев. Однако среды с неопределенным составом малопригодны для изучения физиологии обмена веществ микроорганизмов, поскольку они не позволяют учесть потребление ряда компонентов среды, а с другой стороны выявить, какие вещества образуются по ходу развития м.о. Это связано с тем, что состав натуральных питательных сред очень сложен, кроме того он не является постоянным. Натуральные среды неопределенного состава используются главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления их биомассы и диагностических целей. К числу сред неопределенного состава относят и так называемые среды «полусинтетические». В их состав наряду с известными хим. соединениями входят вещества неопределенного состава Такие среды находят широкое применение в пром. микробиологии для получения аминокислот, витаминов и антибиотиков. В качестве примера таких сред можно назвать: мясопептонная среда, в состав которой одновременно с мясным экстрактом и пептоном входит поваренная соль, фосфорнокислый каши, иногда глюкоза или сахароза, картофельные среды с глюкозой или пептоном.
Синтетические среды - это такие среды в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды могут иметь относительно большой набор компонентов, но могут быть довольно простыми по составу. Синтетические среды наиболее удобны для исследования обмена веществ микроорганизмов. Зная точный состав и количество входящих в среду компонентов, можно изучить их потребление и превращение в соответствующие продукты обмена
По назначению: различают элективные и дифференциально-диагностические среды
Элективные среды обеспечивают развитие преимущественно одного вида м.о. или группы родственных микроорганизмов (менее пригодны или совсем не пригодны для развития других). Такие среды применяют главным образом для выделения.
Микроорганизмов из мест их естественного обитания, для получения накопительных культур.
Дифференциально-диагностические среды : это такие среды, которые позволяют по возможности очень быстро отличить (дифференцировать) одни виды м.о. от других. Их состав подбирается с таким расчётом, чтобы он позволил чётко выявить наиболее характерные свойства данного вида м.о. Нередко это достигается введением в среды специальных красителей-индикаторов.
По физическому состоянию среды разделяют на жидкие, плотные и сыпучие. Для выяснения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, а также для накопления их биомассы или продуктов обмена наиболее удобно применять жидкие среды. Плотные среды используют для выделения чистых культур. В промышленной биологии применяют так называемые сыпучие среды. К ним относятся разваренное пшено, пропитанное питательным раствором.
Вопросы для самоконтроля:
2. Как классифицируют их по агрегатному состоянию?
3. Как делятся питательные среды по назначению? В каких случаях удобнее применять те или иные среды?
4. Какие среды называют дифференциально-диагностическими?
5. Как готовят питательные среды? Какие студнеобразователи чаще всего применяют?
6. Что входит в состав МПА? Как его готовят?
7. Чем отличается МПА от МПЖ?
1. Оформление отчета по лабораторному занятию.
2. Подготовиться к защите лабораторного занятия.