Gélose peptonée à la viande(MPA) est le milieu nutritif universel le plus courant dans la recherche microbiologique.
Composé
- peptone enzymatique
- extrait de viande (1:2)
- chlorure de sodium
- glucose
Description
Le médicament est un milieu nutritif dense de couleur jaune.
Produit sous la forme d'un milieu nutritif dense de 300 ml dans des bouteilles en verre, débouchées avec des bouchons et scellées avec des capsules en aluminium.
But
Il est utilisé pour la culture et l'étude des propriétés culturelles de divers micro-organismes.
Il est possible d'utiliser le médicament comme base nutritionnelle pour la préparation de divers milieux nutritifs ciblés.
Stockage
Durée de conservation - 2 ans. Le milieu est maintenu hermétiquement fermé à des températures de 2 à 25 ° C dans des endroits protégés de la lumière directe du soleil.
Cuisson
Jusqu'à 1 litre de bouillon de viande-peptone ajouter 15-20 g d'agar-agar finement haché. Le milieu est chauffé jusqu'à ce que la gélose soit dissoute (son point de fusion est de 100 ° С, la solidification est de -40 ° С), une réaction légèrement alcaline du milieu s'établit avec une solution à 20% de Na2CO3, et il est versé à travers des entonnoirs dans tubes à essai (mais 10 ml pour verser dans des tasses - colonne d'agar et 5 ml chacun pour obtenir une gélose inclinée et inclinée). Lors du versement de la gélose, il est nécessaire de s'assurer que les bords du tube à essai sont secs, sinon les bouchons colleront au verre. Les tubes à essai avec le milieu sont stérilisés dans un autoclave à 120°C pendant 20 min.
Il existe une autre version du milieu - la gélatine de peptone de viande (MBG), où la gélatine est utilisée à la place de la gélose pour solidifier le milieu. 100-150 g de gélatine sont ajoutés à 1 litre de bouillon de viande-peptone. Le point de fusion dépend du pourcentage dans le milieu. La gélatine 10% fond à 24°C, 15% fond à 25°C. En été, les milieux sont préparés en ajoutant 15% de gélatine. Après dissolution de la gélatine par chauffage doux, une réaction faiblement alcaline s'établit dans le milieu (comme pour le MPB et le MPA), portée à ébullition pendant 5 minutes, puis refroidie à 40-50°C. Parallèlement, battre le blanc d'oeuf avec un petite quantité d'eau, la verser dans le milieu gélatine refroidi, bien agiter et chauffer à nouveau. Le milieu après précipitation des protéines devient transparent. Il est filtré à travers un entonnoir chaud, versé dans des tubes à essai et stérilisé dans une chaudière Koch avec un courant de vapeur, en chauffant le milieu pendant 30 minutes toutes les 24 heures trois fois.
Milieux nutritifs simples Le bouillon peptone-viande (MPB) est la base protéique de tous les milieux. Préparé avec de l'eau de viande additionnée de peptone prête à l'emploi. La peptone est un produit de la digestion incomplète (hydrolyse) des protéines, utilisée comme source d'azote et de carbone. Gélose viande-peptone (MPA) - obtenue en ajoutant au MPB 1, 5 - 3% a g ap - a g apa. L'agar-agar est un produit d'algue qui contient des polysaccharides de haut poids moléculaire.
Les milieux nutritifs sélectifs stimulent la croissance de certains microbes et inhibent la croissance d'autres (en raison de l'ajout de certains composants au milieu). Les bactéries pathogènes se multipliant et s'accumulant dans ces milieux, on les appelle aussi milieux d'enrichissement. Par exemple, le milieu de Muller sert à accumuler Salmonella. De la craie, de la solution de Lugol et de l'hyposulfite de sodium sont ajoutés au milieu nutritif. Lorsque ces substances interagissent, du tétrathionate de sodium se forme, ce qui inhibe la croissance d'Escherichia coli, mais crée des conditions favorables à la reproduction de Salmonella.
Les milieux de diagnostic différentiel permettent de distinguer un type de microbe d'un autre sur la base d'une activité biochimique différente des bactéries. La composition des milieux de diagnostic différentiel comprend : - le milieu nutritif principal qui assure la reproduction des bactéries, - un certain substrat chimique, une attitude différente par rapport à laquelle est une caractéristique de diagnostic, - un indicateur dont le changement de couleur indique la dégradation du substrat et la formation de produits finaux.
Milieu Endo Ingrédients : gélose nutritive, lactose, fuchsine basique. Le médium a une teinte rose. Les colonies de bactéries qui fermentent le lactose deviennent rouge foncé; les colonies de bactéries qui ne fermentent pas le lactose restent incolores.
Milieu de Levin Ingrédients : gélose nutritive, lactose, éosine et bleu de méthylène. Le médium a une teinte brunâtre. Les colonies de bactéries fermentant le lactose deviennent bleu foncé; les colonies de bactéries qui ne fermentent pas le lactose restent incolores.
Milieu de Ploskirev Ingrédients : gélose nutritive, lactose, rouge neutre, sels biliaires, vert brillant. Le médium a une teinte rosâtre-jaunâtre. Les colonies de bactéries fermentant le lactose virent au rouge airelle; les colonies de bactéries qui ne fermentent pas le lactose restent incolores.
Technique d'ensemencement Méthode de Drygalski : Une goutte de matériel d'essai est ajoutée à la première boîte de Pétri et étalée sur la surface du milieu avec une spatule stérile. Puis, avec la même spatule (sans la brûler dans la flamme du brûleur), le même semis est fait dans les deuxième et troisième coupelles. A chaque semis de bactéries sur la spatule, il y en a de moins en moins et, lors du semis sur la troisième coupelle, les bactéries vont se répartir sur la surface du milieu nutritif séparément les unes des autres et des colonies isolées vont se former. Semis en boucle avec traits parallèles
Semis avec une boucle en traits parallèles Une colonie est une accumulation isolée visible de représentants d'un type de micro-organismes, qui se forme lors de la reproduction d'une cellule bactérienne sur un milieu nutritif dense. Les colonies de bactéries d'espèces différentes diffèrent les unes des autres par leurs caractéristiques culturelles.
20 g d'agar sont ajoutés à 1000 ml de bouillon de viande-peptone avant stérilisation et bouillis à feu doux sous agitation constante jusqu'à dissolution complète.
La gélose viande-peptone, refroidie à une température de 50-55°C, est clarifiée au blanc d'œuf (à raison d'une protéine pour 1000 ml de gélose viande-peptone), placée dans l'autoclave sans visser le couvercle de l'autoclave, ou dans l'appareil de Koch pendant 1 heure pour que la protéine coagule et, en se décantant, emporte les particules en suspension. La gélose peptonée à la viande chaude est filtrée à travers un filtre en gaze de coton, un pH de 7,0 à 7,4 y est réglé, versé dans des flacons ou des tubes à essai et stérilisé dans un autoclave à une température de 120 ° C pendant 20 minutes.
Gélatine de peptone de viande
De la gélatine finement hachée est ajoutée au bouillon de viande-peptone à raison de 10-15 g pour 100 ml. Après gonflement, la gélatine est dissoute en chauffant lentement au bain-marie à une température de 40-45 ° C, le pH est réglé à 7,0 avec une solution de bicarbonate de sodium à 10%, filtrée à chaud sur un filtre en papier. Le milieu est versé dans des tubes à essai de 5-8 ml, stérilisés par fractionnement pendant 3 jours à l'heure à une température de 100°C ou une fois à 110°C pendant 20 minutes. Après stérilisation, le milieu est refroidi.
eau peptonée
10 g de peptone et 5 g de chlorure de sodium sont ajoutés à 1000 ml d'eau distillée, bouillis jusqu'à dissolution de la peptone, filtrés et ajustés à pH 7,2-7,4, après quoi ils sont stérilisés pendant 30 minutes à une température de 120 ° C.
Milieux électifs pour la détection des agents pathogènes des toxines d'origine alimentaire et des co-infections Les milieux fuchsine - gélose au sulfite (milieu Endo), Ploskirev bacto-agar, le milieu méthylène-éosine de Levin, la gélose au sulfite de bismuth (milieu Wilson-Blair) sont préparés à partir d'un standard sec médias selon la prescription indiquée sur l'étiquette.
Mercredi Smirnov
A 1 litre de MP A fondu, ajouter 10 à 12 g de lactose et 4 à 5 ml d'une solution à 1,2 % de bromocrésolpurpur. Stériliser de manière fractionnée (ou à 0,5 atm pendant 20 minutes).
Milieux d'accumulation de Salmonella Müller mercredi Pour préparer le milieu de Muller, des solutions de sulfate de sodium et de Lugol sont d'abord préparées.
Dans une éprouvette graduée contenant 50 g de sulfate de sodium, ajouter jusqu'à 100 ml d'eau distillée. La solution est versée dans une bouteille et stérilisée à la vapeur pendant 30 minutes.
Pour préparer le milieu de Muller, 4,5 g de craie sont placés dans des flacons stériles et stérilisés à la vapeur sèche pendant 1 heure, puis 90 ml de bouillon de digestion de Hottinger contenant 130-150 mg% d'azote sont versés dans chaque flacon, le pH est réglé à 7,2 -7,4 et stérilisé pendant 30 minutes à une température
120°C Après stérilisation, le pH est à nouveau fixé à 7,2-7,4, pour lequel il est contrôlé dans l'un des flacons et le volume d'acide chlorhydrique ou de soude nécessaire pour titrer une quantité donnée de milieu est déterminé. Puis, dans des conditions aseptiques, avant utilisation, ajouter 2 ml de solution de Lu-gol et 10 ml de solution de sulfate de sodium.
Tableau 1Croissance des agents responsables des intoxications alimentaires sur les milieux électifs et l'AMP
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Nom |
du mercredi au |
intestinal |
Salmonelle | |
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petites colonies |
petites colonies |
Solide |
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Rose |
rouge avec |
couleurs de l'environnement, couleur |
hauteur, couleur |
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|
métallique |
l'environnement ne change pas |
l'environnement n'est pas |
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ombre, moyen |
change |
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autour des fards à joues | ||||
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Smirnova |
violet- |
petites colonies |
petites colonies |
Solide |
|
couleur |
couleur jaune, |
couleurs de l'environnement, |
hauteur, couleur |
|
|
environnement autour |
teinte bleue- |
l'environnement n'est pas |
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|
com, la couleur du support ne change pas |
change |
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brun- |
petites colonies |
petites colonies |
Solide |
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|
couleur |
marron foncé |
couleurs de l'environnement, |
hauteur, couleur |
|
|
couleurs, couleur moyenne |
lilas de- |
l'environnement n'est pas |
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|
da ne change pas |
teinte, la couleur du médium ne change pas |
change |
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Ploskire- |
Brique- |
petites colonies |
petites colonies |
Séparé |
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rouge |
Rouge, |
couleurs moyennes, moyen | ||
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la couleur du support ne change pas |
oui éclaircit un peu |
couleurs de l'environnement |
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Paille- |
petites colonies |
petites colonies |
Solide |
|
|
couleur grise |
gris avec |
hauteur, couleur |
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|
teinte bleutée |
l'environnement ne change pas |
Bouillon de peptone de viande bouillon de viande-peptone
(Source : « Microbiologie : glossaire des termes », Firsov N.N., M : Outarde, 2006)
Bouillon de peptone de viande(MPB) est le principal milieu nutritif liquide utilisé pour la culture de bactéries chimioorganotrophes. Préparé à base d'eau de viande ou de 0,5 à 1% de solution aqueuse d'extrait de viande, en y ajoutant 0,5 à 1% de peptone et 0,5% de chlorure de sodium. Régler pH 7,4 -7,6. Stériliser à l'autoclave à 120°C pendant 15 à 30 minutes. Cm. Milieu nutritif bactériologique.
(Source : Glossaire des termes de microbiologie)
Voyez ce qu'est le "bouillon de viande-peptone" dans d'autres dictionnaires :
- (MPB) milieu nutritif liquide pour la culture de micro-organismes, constitué d'eau de viande et de peptone (1 2 %) ; sert de base à de nombreux autres milieux de culture liquides... Grand dictionnaire médical
Bouillon de viande, milieu nutritif utilisé pour la culture de micro-organismes impliqués dans la dégradation des protéines. Selon les additifs, il y a, par exemple, la glycérine B., le nitrate B., le lactose B., le plus courant est ... ... Dictionnaire de microbiologie
MILIEU NUTRITIF- MILIEUX NUTRITIONNELS, milieux artificiels d'une composition ou d'une autre, destinés à la culture de microbes et de protozoaires en laboratoire. Ils ont été introduits pour la première fois pour isoler certains types de bactéries par R. Koch en 1881, qui a créé ... ... Grande encyclopédie médicale
Substrats constitués de composants qui fournissent les conditions nécessaires à la culture de micro-organismes ou à l'accumulation de leurs produits métaboliques. Les milieux nutritifs diffèrent par leur objectif, leur consistance et leur composition. Selon leur destination... Encyclopédie médicale
Le milieu nutritif est une substance ou un mélange de substances utilisé pour la culture de macro et micro-organismes. Il existe de nombreux milieux de culture biologiques standards. Table des matières 1 Exigences pour les environnements 2 Classification ... Wikipedia
Sous le nom de bactéries en science, les plus petits organismes microscopiques appartenant au règne végétal sont connus. Dans leur organisation, dans leurs caractéristiques morphologiques, les B. sont les plus proches des soi-disant cyan ou ... ... Dictionnaire encyclopédique F.A. Brockhaus et I.A. Efron
Ag antigène AE unité antitoxique ou antigénique antibactérienne. antibactérien At anticorps ATP adénosine acide triphosphorique bactérie. bactérioscope bactériologique bactériologique bactériologique. activité bactéricide ALS bactérioscopique ... ... Dictionnaire de microbiologie
1% de peptone est ajoutée à 100 ml de bouillon de viande La peptone est un produit de l'hydrolyse enzymatique des protéines. De la peptone est ajoutée au milieu pour augmenter sa valeur nutritive ; pour épaissir le milieu, on y ajoute 2 à 4 % d'agar-agar.
Milieu nutritif d.b. légèrement acide par rapport au cytoplasme des micro-organismes qui y seront cultivés. Pour ce faire, ajoutez 0,5% de sel au milieu. La réaction du milieu est de 7,0 à 7,4. Après l'introduction de l'agar-agar, le mélange est chauffé jusqu'à formation de gel incomplète.
Préparation de viande-peptone Gélatine.
Ce milieu est préparé de manière similaire au MPA, mais pour le compactage, il est utilisé sur de l'agar-agar, de la gélatine en une quantité de 10-12%. La GRN présente un certain nombre d'avantages par rapport à l'AMP. Il se combine mieux avec le verre, les bactéries putréfactives forment des colonies très caractéristiques lorsqu'elles poussent sur ce milieu, de plus, certaines des bactéries putréfactives ont la capacité de liquéfier la gélatine, ce qui est très important pour déterminer le type de bactérie. Mais NRM" fond à une température de 30-37 0 C, c'est son inconvénient.
Des jours d'étude des caractéristiques biochimiques des micro-organismes utilisent des milieux phagostiques différentiels. Les médias Hiss peuvent servir d'exemple de tels médias. Ils sont utilisés pour étudier la capacité de m.o. fermenter les glucides.
La composition du milieu Giss comprend 1% de tout glucide, 1% d'agar-agar et un indicateur. Un exemple d'un tel milieu est le milieu Endo utilisé pour isoler Bact. coli. La composition de ce milieu comprend, en plus du MPA, une solution alcoolique saturée de fuchsine, 1% lactose Na 2 SO 3 , pH 7-7,2 Bact. coli produit des colonies à reflets métalliques sur milieu d'Endo. Pour étudier les moisissures, on utilise le milieu de Sabouraud, de composition suivante : 1 % glucose, 1 % peptone, 2 % agar-agar pH 5-5,6.
PROCÉDURE DE TRAVAIL:
Préparez 100 ml de MPA :
1. Ils boivent de l'eau dans une casserole et la mettent sur un brûleur - ils préparent un bain-marie.
2. Verser 100 ml de MB dans le ballon. Peser 2 g de peptone. 0,5 g d'agar-agar. Tout cela est placé dans un flacon avec du bouillon de viande.
3. Le ballon est placé dans une casserole d'eau chaude et le contenu du ballon est chauffé jusqu'à ce que l'agar-agar soit complètement fondu et que le milieu devienne homogène. Ensuite, de la soude est ajoutée (à une réaction légèrement alcaline selon le tournesol).
4. Le milieu fondu est versé dans des éprouvettes de 10 ml.
5. Préparez des cotons-tiges, couvrez-les de gaze et fermez les bouchons avec le milieu nutritif préparé.
6. Les tubes à essai contenant du MPA sont placés dans des paniers. Remettre au laborantin pour stérilisation.
Classification des milieux de culture
Par composition, le milieu nutritif se divise en 2 groupes : les milieux naturels de composition indéterminée et les milieux synthétiques.
naturel communément appelés milieux constitués de produits d'origine animale ou végétale, ayant une chimie indéfinie complexe. composé. La base de tels environnements est constituée de diverses parties de plantes vertes, de tissus animaux. malt, levure, fruits, légumes... La plupart d'entre eux sont utilisés sous forme d'extraits ou d'infusions. Cependant, les milieux de composition indéterminée sont peu utiles pour étudier la physiologie du métabolisme des microorganismes, car ils ne permettent pas de prendre en compte la consommation d'un certain nombre de composants du milieu, et d'autre part, d'identifier quelles substances se forment lors du développement de m.s. Cela est dû au fait que la composition des milieux nutritifs naturels est très complexe, de plus, elle n'est pas constante. Les milieux naturels de composition indéterminée sont principalement utilisés pour entretenir des cultures de micro-organismes, pour accumuler leur biomasse et à des fins de diagnostic. Les milieux dits « semi-synthétiques » font également partie des milieux à composition indéfinie. Dans leur composition, avec des produits chimiques bien connus. Les composés comprennent des substances de composition incertaine. Ces milieux sont largement utilisés dans l'industrie. microbiologie pour obtenir des acides aminés, des vitamines et des antibiotiques. A titre d'exemple de tels milieux, on peut citer : le milieu viande-peptone, qui comprend simultanément avec l'extrait de viande et la peptone le sel de table, le phosphate de bouillie, parfois le glucose ou le saccharose, le milieu pomme de terre avec glucose ou peptone.
Médias synthétiques- ce sont des milieux qui ne contiennent que certains composés chimiquement purs, pris à des concentrations bien déterminées. Les supports synthétiques peuvent avoir un ensemble relativement large de composants, mais peuvent être assez simples dans leur composition. Les milieux synthétiques sont les plus pratiques pour étudier le métabolisme des micro-organismes. Connaissant la composition et la quantité exactes des composants inclus dans l'environnement, il est possible d'étudier leur consommation et leur transformation en produits métaboliques correspondants.
Sur rendez-vous : il existe des environnements de diagnostic électifs et différentiels
Environnements électifs assurer le développement d'un type prédominant de m.o. ou des groupes de micro-organismes apparentés (moins adaptés ou pas du tout adaptés au développement d'autres). Ces milieux sont principalement utilisés pour l'isolement.
Micro-organismes de leurs habitats naturels pour obtenir des cultures d'enrichissement.
Environnements de diagnostic différentiel: ce sont des environnements qui permettent de distinguer (différencier) très rapidement certains types de m.o. des autres. Leur composition est choisie de manière à ce qu'elle permette d'identifier clairement les propriétés les plus caractéristiques de ce type de m.o. Ceci est souvent réalisé en introduisant des colorants indicateurs spéciaux dans le milieu.
Par condition physique les médias sont divisés en liquide, solide et en vrac. Pour clarifier les caractéristiques physiologiques et biochimiques des micro-organismes, ainsi que pour accumuler leur biomasse ou leurs produits métaboliques, il est plus pratique d'utiliser des milieux liquides. Les milieux denses sont utilisés pour isoler les cultures pures. En biologie industrielle, on utilise des milieux dits granulaires. Il s'agit notamment de mil bouilli trempé dans une solution nutritive.
Questions pour la maîtrise de soi :
2. Comment sont-ils classés selon leur état d'agrégation ?
3. Comment les milieux nutritifs sont-ils divisés selon leur objectif ? Dans quels cas est-il plus pratique d'utiliser certains médias ?
4. Quels environnements sont appelés diagnostic différentiel ?
5. Comment les milieux de culture sont-ils préparés ? Quels sont les gélifiants les plus couramment utilisés ?
6. Qu'est-ce qui est inclus dans l'AMP ? Comment cela est-il préparé?
7. Quelle est la différence entre AMP et GRN ?
Devoirs:
1. Faire un rapport sur une leçon de laboratoire.
2. Préparez-vous pour la soutenance de la leçon de laboratoire.
Labo #5